蛋白质测序主要有两种方法。
一是N端测序。化学法中,如桑格测序,利用2,4 - 二硝基氟苯与N端氨基反应,经过多步反应来确定氨基酸序列。酶解法是用氨肽酶从N端逐个水解氨基酸来测序。
二是C端测序。化学法可以通过与C端羧基反应的试剂来逐步确定序列。酶解法是用羧肽酶从C端开始水解氨基酸,质谱法也是常用的手段。它先将蛋白质酶解成肽段,测定肽段质量后,通过软件匹配数据库来推导蛋白质序列。
蛋白质 测序方法-怎样通过蛋白质寻找生物体内的未知基因,进行计应定位呢?
首先进行蛋白质测序,推出mRNA,然后进行blast比对,找到相关基因,如果同源性很高,就可以认为是该基因的同源基因
蛋白质 测序方法-蛋白质测序方法
Sanger试剂用于鉴定蛋白质和多肽的N-末端氨基酸残基。
Edman降解才是氨基酸序列的测定技术。但是它不能测超过40个残基的序列。
所以测大的蛋白质的序列时,需要用化学试剂将蛋白质降解为一些肽段。即需要水解。水解时一般用三氟乙酸进行酸水解。
酸水解就是加热酸进行水解,而碱水解就是加入碱进行水解。蛋白质一般用酸水解。而酯类则两种水解方式都常用。
知道了吗?^_^
蛋白质 测序方法-蛋白质序列测定的原理与方法
百度百科"蛋白质测序"词条下有详细介绍
1肽链的拆开和分离
●2测定蛋白质分子中多肽链的数目
●3二硫键的断裂
●4测定每条多肽链的氨基酸组成,并计算出氨基酸成分的分子比
●5N端、C端的测定
●6多肽链断裂
●7测定每个肽段的氨基酸顺序。
●8确定肽段在多肽链中的次序。
●9确定原多肽链中二硫键的位置。
蛋白质 测序方法-蛋白质序列测定的原理与方法
百度百科"蛋白质测序"词条下有详细介绍
1肽链的拆开和分离
●2测定蛋白质分子中多肽链的数目
●3二硫键的断裂
●4测定每条多肽链的氨基酸组成,并计算出氨基酸成分的分子比
●5N端、C端的测定
●6多肽链断裂
●7测定每个肽段的氨基酸顺序。
●8确定肽段在多肽链中的次序。
●9确定原多肽链中二硫键的位置。